2025-06-12 01:01:29
由于RNA酶是無(wú)處不在的,所以需要加入DEPC使RNA酶失活,阻止RNA的降解。防護攻略:可滅活各種蛋白質(zhì),是RNA酶的強抑制劑。DEPC是一種潛在的致物質(zhì),在操作中應盡量在通風(fēng)的條件下進(jìn)行,并避免接觸皮膚。DEPC毒性并不是很強,但吸入的毒性是強的,使用時(shí)戴口罩,不小心占到手上注意立即沖洗。毒性級別:★★★實(shí)驗場(chǎng)景:PCR,NorthernBlot等實(shí)驗中,Trizol是一種常用的總RNA抽提試劑,可以直接從細胞或組織中提取總RNA。其含有苯環(huán)類(lèi)等物質(zhì),能迅速破碎細胞并抑制細胞釋放出的核酸酶。在樣品裂解過(guò)程中Trizol能夠抑制RNA酶活性保持RNA完整性。防護攻略:含有大量苯環(huán)類(lèi)有毒物質(zhì),有很強的毒性、腐蝕性和揮發(fā)性,皮膚接觸Trizol會(huì )引起燒傷,進(jìn)入眼睛可能導致失明。不深接觸請立即用大量去垢劑和水沖洗,如仍有不適,請聽(tīng)取醫生意見(jiàn)。使用時(shí)戴手套、口罩和護目鏡做好防護。9.氯仿(CHCl3)毒性級別:★★★★實(shí)驗場(chǎng)景:動(dòng)物實(shí)驗中,氯仿常用于用于各種動(dòng)物的吸入麻醉,其麻醉作用比大,誘導期及興奮期都極短,吸入氣體中含1~2%容量的氯仿即能使動(dòng)物麻醉。防護攻略:對皮膚、眼睛、黏膜和呼吸道有刺激作用。它是一種劑,可損害肝和腎。它也易揮發(fā),避免吸入揮發(fā)的氣體。SD大鼠腎足細胞如何分離培養。上海如何原代細胞分離培養廠(chǎng)家
而且因為有5條定位線(xiàn),與劃痕相交,這樣就有10個(gè)可固定監測點(diǎn),不作重復,誤差也很小。2、如果你連續監測24小時(shí),你需要考慮到劃痕縮小是細胞遷移和細胞繁殖共同作用的結果,而不是單純的細胞遷移。如果你要單純的考慮細胞遷移,你可以先用絲裂霉素(1ug/ml)處理一小時(shí),抑制細胞的**,這樣你的結果就是細胞遷移的作用了。另外,使用無(wú)血清培養基也可以降低增殖對實(shí)驗結果的影響。3、照片拍完之后,可以用ImageJ來(lái)測量劃痕區域的像素定量比較細胞遷移的速度。4、雖然無(wú)血清培養可以忽略細胞增殖的影響,但是由于細胞內信號傳導系統整體性的下調節,細胞遷移的速度也會(huì )慢很多。5、應盡量清洗掉散落的細胞,對于一些細胞,低血清濃度下也能重新貼壁并增殖,此外也影響數據美觀(guān)。四、常見(jiàn)問(wèn)題1.劃痕法測量適用的細胞范圍較小,一般只適用于上皮細胞,纖維樣細胞。2.雖然無(wú)血清培養可以忽略細胞增殖的影響,但是由于細胞內信號傳導系統整體性的下調節,細胞遷移的速度也會(huì )慢很多。3、在用PBS緩沖液沖洗時(shí),注意貼壁慢慢加入,以免沖散單層貼壁細胞,影響實(shí)驗拍照結果。4、一般做劃痕實(shí)驗,需要排除細胞增殖的影響,一般在不影響細胞增殖的情況下采用低血清(