珠海鼠尾膠原廠(chǎng)家批發(fā)價(jià) 蘇州君欣生物科技供應

鼠尾膠原蛋白I型，用那一種膠原酶可以溶解：1．將膠原加入到0.1M的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時(shí)直到完全溶解。2．建議將溶液轉移到擰口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動(dòng)或攪拌。在2-8度中放置過(guò)夜。在無(wú)菌條件下轉移上層的膠原溶液。我們不建議用過(guò)濾的方法無(wú)菌化。已經(jīng)發(fā)現該方法會(huì )導致丟失蛋白。3．稀釋一定數量的膠原溶液。4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養瓶。在室溫或37度結合數小時(shí)或者2-8度過(guò)夜。5．從包被表面除去多余的液體。過(guò)夜干燥。如果膠原溶液不是無(wú)菌的，這時(shí)候可以在無(wú)菌細胞操作室中暴光在紫外線(xiàn)下過(guò)夜消毒。在接種細胞前用無(wú)菌的水漂洗。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗的長(cháng)時(shí)程記錄，并且制作簡(jiǎn)便，成本低廉。布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗的長(cháng)時(shí)程記錄。珠海鼠尾膠原廠(chǎng)家批發(fā)價(jià)

要準備的器具：組織剪2把，有齒鑷1把，無(wú)齒鑷1把，200ml燒杯1個(gè)，培養皿1個(gè)，帶蓋廣口瓶1個(gè)，離心管、小瓶數個(gè)，滴管若干。以上物品須經(jīng)嚴格高壓消毒滅菌。需配制的液體0.1％醋酸溶液。經(jīng)44.48N10min高壓蒸汽滅菌(或是過(guò)濾除菌)后備用。此外還有用消毒雙蒸水配制75％酒精溶液。取大鼠尾巴，洗凈，置75%酒精浸泡消毒后，手持尾巴，用止血鉗夾住尾巴較高，折斷尾骨后拉出尾腱，將尾腱剪碎后置消毒的三角燒瓶中，稱(chēng)尾腱的重量，按每克尾腱50ml的比例加入0.1%醋酸溶液，搖晃，使尾腱分散于醋酸溶液中，4℃放置48小時(shí)，離心。吸取其上清，分裝至小瓶，4℃保存。上述制備過(guò)程均在無(wú)菌條件下完成。蘇州正規鼠尾膠原廠(chǎng)家鼠尾I型膠原蛋白系采用方法在無(wú)菌下制備，純度達到95%以上。

鼠尾膠原：含細胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）準備好懸浮于培養液的細胞，并放置于冰浴中。將200μL本品加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過(guò)來(lái)把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會(huì )由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結），立即混勻。再加入23μL10×PBS或10×培養液，混勻后立即加到培養器皿中（混勻后pH為7左右，如果PBS或培養液中沒(méi)有加酚紅，初次使用時(shí)需要測定pH值）。加入760μL的細胞懸浮液，混勻后立即加到培養器皿中。將培養器皿在室溫放置20min待膠凝固后，加入適當體積的細胞培養液，轉移到培養箱中培養。本品在室溫下pH中性時(shí)可迅速成膠，在操作過(guò)程中要盡量保持低溫。保存條件4℃保存，切勿凍存，有效期一年。

三維膠原的制備：鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上，pH7左右時(shí)可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中，在成膠過(guò)程中需要加入0.06X體積的0.1mol/LNaOH來(lái)中和。需要的溶液(均需要無(wú)菌、預冷):10xPBS(可含10mg/L的酚紅用于pH指示)或10x培養液,0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),雙蒸水A．不含細胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入690ulH2O。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反過(guò)來(lái)把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會(huì )由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結），立即混勻。結果無(wú)鼠尾膠原時(shí)，前庭毛細胞懸浮于外液，不宜封接。

鼠尾膠原蛋白耗子尾汁還能變得更加，一種被稱(chēng)作鼠尾膠原蛋白的“珍貴”液體就來(lái)自大鼠的尾巴，制作過(guò)程需要經(jīng)歷醋酸抽提、氯化鈉沉淀和磷酸氫二鈉沉淀等步驟，才能從鼠尾中獲得珍貴的膠原蛋白。這種膠原蛋白在37℃的條件下會(huì )形成3股螺旋結構，可以用來(lái)當作細胞培養的基質(zhì)。細胞培養過(guò)程中，細胞需要貼附在培養皿表面（懸浮培養細胞除外）才能完成生長(cháng)過(guò)程，而有一些細胞卻總是不太給力，自己完成不了貼壁過(guò)程或者貼壁困難，這個(gè)時(shí)候鼠尾膠原蛋白就能承擔起讓細胞更容易貼壁的作用。這一步也被稱(chēng)作涂層（coating），給培養皿涂上了一層膠原蛋白后，細胞就能更好地貼附上去，除了培養皿，一些需要使用海藻碳酸鈣微球培養得細胞，同樣也可以用鼠尾膠原蛋白協(xié)助細胞貼壁生長(cháng)。制備鼠尾膠原：重復步驟2、3，直至尾腱量夠用。蘇州正規鼠尾膠原服務(wù)電話(huà)

制備鼠尾膠原（兩個(gè)同學(xué)一組操作）。珠海鼠尾膠原廠(chǎng)家批發(fā)價(jià)

鼠尾膠原醋酸溶解：1．將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時(shí)直到完全溶解。2．建議將溶液轉移到擰口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動(dòng)或攪拌。在2-8度中放置過(guò)夜。在無(wú)菌條件下轉移上層的膠原溶液。我們不建議用過(guò)濾的方法無(wú)菌化。已經(jīng)發(fā)現該方法會(huì )導致丟失蛋白。3．稀釋一定數量的膠原溶液。4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養瓶。在室溫或37度結合數小時(shí)或者2-8度過(guò)夜。5．從包被表面除去多余的液體。過(guò)夜干燥。如果膠原溶液不是無(wú)菌的，這時(shí)候可以在無(wú)菌細胞操作室中暴光在紫外線(xiàn)下過(guò)夜消毒。在接種細胞前用無(wú)菌的水漂洗。珠海鼠尾膠原廠(chǎng)家批發(fā)價(jià)