2025-06-04 10:02:32
PEI在于可以應用于體內試驗。當初試驗經(jīng)費很有限,被逼無(wú)奈只能放棄脂質(zhì)體2000,選擇PEI,以至于相當長(cháng)的時(shí)間內,轉染試驗都不順利。下面是幾點(diǎn)關(guān)于PEI轉染的注意要點(diǎn):1.PEI的使用量可以參照脂質(zhì)體2000的說(shuō)明書(shū),所用質(zhì)粒盡量去內2.轉染時(shí),一定要把PEI+DMEM加入到質(zhì)粒+DMEM中,順序不可錯,輕微混勻,靜止20min3.轉染后4小時(shí),一定要換液!換含有FBS的完全培養液!因為PEI對細胞毒性太大4.如果后續試驗涉及到穩定篩選,建議把血清濃度適當提高。PS:事實(shí)證明,PEI是可行的,已經(jīng)做出穩定細胞系了。Polysciences轉染與遞送相關(guān)產(chǎn)品已正式移交KyforaBio,相關(guān)產(chǎn)品標簽將變更為KyforaBiobyPolysciences,后續購買(mǎi)請認準備新品牌。更多關(guān)于PEI轉染試劑相關(guān)的信息,可咨詢(xún)上海曼博生物醫藥科技有限公司!哪個(gè)品牌的PEI轉染試劑性?xún)r(jià)比會(huì )比較高呢?上海原裝PEI轉染試劑
瞬時(shí)轉染方法1.接種細胞:轉染前,用膠原酶消化細胞并計數(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養的器皿,總體積如表1所示,每個(gè)孔置入的細胞量應能使轉染時(shí)細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無(wú)蛋白培養基稀釋適量DNA。用同樣的培養基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線(xiàn)性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線(xiàn)性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時(shí),請用圓底聚丙烯管,例如Falcon5mL/14mL離心管。3.轉染細胞:直接向每個(gè)孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養板/培養皿。在無(wú)血清條件下轉染時(shí),去除生長(cháng)培養基,替換成無(wú)血清培養基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染3h后,添加?體積的包含30%血清的生長(cháng)培養基。4.孵育細胞和分析結果:在CO2培養箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉染后快7h即可檢測到轉入基因的表達。請自行確定檢測時(shí)間。更多關(guān)于Polysciences PEI相關(guān)內容歡迎咨詢(xún)上海曼博生物!歡迎關(guān)注公眾號Mine-bio上海原裝PEI轉染試劑Polysciences的PEI轉染試劑品質(zhì)如何?
1.對于某些類(lèi)型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉染前兩天鋪板可顯著(zhù)提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉染時(shí)細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無(wú)蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養基以達到*轉染效率。其他的無(wú)蛋白培養基則需測試與線(xiàn)性PEI轉染試劑的兼容性。4.對大多數細胞來(lái)而言,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線(xiàn)性PEI轉染試劑進(jìn)行優(yōu)化。更多產(chǎn)品信息,歡迎咨詢(xún)上海曼博生物!
PEIMAX粉末配置方法:1)將1gPEIMAX40K放入盛有900mL水的玻璃燒杯中;2)放入攪拌轉子,放置于磁力攪拌器上,設置攪拌程序以形成一個(gè)較小的漩渦;3)等待PEIMAX40K完全溶解,通常需要5分鐘左右;4)用25mL塑料移液管加入1N氫氧化鈉滴定至pH6.9~7.1;5)如果不小心超過(guò)7.1,則使用1N的鹽酸和新的塑料移液管將pH重新滴定至6.9~7.1;6)將溶液轉移到1L玻璃量筒中,加入水定容至1L;7)用無(wú)菌真空過(guò)濾膜過(guò)濾配制的轉染試劑溶液;8)按需分裝,4°C儲存(切記不可冷凍);注:未經(jīng)配制的粉末有效期為2年。配置成液體后分裝在合適的瓶子中,并且保存在4℃的轉染試劑將可在6個(gè)月之內保持性能。如jin用于蛋白定性研究,分裝的轉染試劑可延長(cháng)有效使用期至1年。
哪個(gè)品牌的PEI轉染試劑性?xún)r(jià)比高?
抗體藥物研發(fā)客戶(hù)提供小眾創(chuàng )新產(chǎn)品,包括從Researchgrade到cGMP等級的無(wú)動(dòng)物源培養基質(zhì),轉染試劑、病毒轉導試劑、基因編輯工具等產(chǎn)品和定制服務(wù),支持ATMP(AdvanceTherapyMedicinalProducts)藥物研發(fā)從R&D到Clinicaltrial以及后期商業(yè)化的無(wú)縫轉化;以及提供藥物開(kāi)發(fā)和探索的抗體文庫定制和商業(yè)授權靈活的CHO工程細胞株以支持抗體藥物的商業(yè)化生產(chǎn),以此希望幫助國內科研工作者快速地接觸世界范圍內的技術(shù),分享研發(fā)工具進(jìn)步帶來(lái)的技術(shù)紅利,終為細胞、基因產(chǎn)業(yè)以及再生醫學(xué)行業(yè)等乃至整個(gè)生命科學(xué)行業(yè)賦能!更多關(guān)于PEI轉染試劑相關(guān)產(chǎn)品問(wèn)題,歡迎咨詢(xún)上海曼博生物!線(xiàn)性的和分支的PEI轉染試劑哪個(gè)好?上海原裝PEI轉染試劑
PEI轉染試劑可以轉染哪些細胞呢?上海原裝PEI轉染試劑
接種細胞:轉染前,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養的器皿,每個(gè)孔置入的細胞量應能使轉染時(shí)細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無(wú)蛋白培養基稀釋適量DNA。用同樣的培養基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線(xiàn)性PEI轉染試劑(這個(gè)需要客戶(hù)自行摸索配比,每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會(huì )稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線(xiàn)性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時(shí),請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉染細胞:直接向每個(gè)孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養板/培養皿。在無(wú)血清條件下轉染時(shí),去除生長(cháng)培養基,替換成無(wú)血清培養基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長(cháng)培養基。更多關(guān)于Polysciences PEI轉染試劑相關(guān)問(wèn)題,歡迎咨詢(xún)上海曼博生物!上海原裝PEI轉染試劑