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上海GMPPEI轉染試劑官方代理 真誠推薦 上海曼博生物醫藥科技供應

2025-06-05 02:03:51

PEIMAX-----高產(chǎn)工業(yè)化轉染試劑-高度濃縮,可制備大量轉染試劑Polysciences轉染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)的產(chǎn)品,因其較高的轉染效果,已大量應用于工業(yè)化生產(chǎn)。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽(yáng)離子電荷密度的有機大分子,每相隔二個(gè)碳原子,即每“第三個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子,使得聚合物網(wǎng)絡(luò )在任何pH下都能充當有效的“質(zhì)子海綿”(protonsponge)體。PEI可用作轉染試劑,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉染真核細胞。PEIMAX40K是由Polysciences出品的全合成線(xiàn)性聚乙烯亞胺瞬時(shí)轉染試劑。PEIMAX是一款高度濃縮的粉劑,大量科學(xué)家選擇PEIMAX,在內部自行制備低成本高效益的PEI轉染試劑。多年以來(lái),經(jīng)過(guò)眾多業(yè)內人士評審的公開(kāi)研究和出版文獻表明,在HEK293、CHO和Sf9系統中可獲得很高的轉染效率,在重組抗體和病毒載體生產(chǎn)中穩定性高,可靠性強。PEIMAX提供從96孔板到200L生物反應器持續的高基因表達細胞體系,實(shí)現從新藥研發(fā)到工業(yè)化生產(chǎn)的輕松過(guò)度。而且與大多數細胞轉染方案相比,使用PEIMAX至少可降低40%轉染成本(部分案例可降低90%轉染成本)。PEI轉染試劑能用于體內轉染么?上海GMPPEI轉染試劑官方代理

產(chǎn)品特點(diǎn):PEIMAX40K是線(xiàn)性聚乙烯亞胺鹽酸鹽形式(LinearPolyethylenimineHydrochloride),是線(xiàn)性化聚乙烯亞胺PEI25K的升級產(chǎn)品。相比于PEI25K,PEIMAX40K:1.完全水解(去乙?;?;2.鹽酸鹽形式,具更高的水溶特性;3.含更長(cháng)連續性乙烯亞胺片段,其質(zhì)子化氮水平比PEI25K提高11%以上。應用領(lǐng)域:PEIMAX40K(cat#24765)是一款非GMP等級的PEI轉染試劑,適用于基礎學(xué)術(shù)研究和藥物研發(fā)早期階段,以固體粉末形式提供,需用戶(hù)自行配置(詳情見(jiàn)使用方法)?;蛘哧P(guān)注我們的公眾號:Mine-bio上海進(jìn)口PEI轉染試劑官方代理有人知道PEI轉染試劑的價(jià)格嗎?

PEIMAX粉末配置方法:1)將1gPEIMAX40K放入盛有900mL水的玻璃燒杯中;2)放入攪拌轉子,放置于磁力攪拌器上,設置攪拌程序以形成一個(gè)較小的漩渦;3)等待PEIMAX40K完全溶解,通常需要5分鐘左右;4)用25mL塑料移液管加入1N氫氧化鈉滴定至pH6.9~7.1;5)如果不小心超過(guò)7.1,則使用1N的鹽酸和新的塑料移液管將pH重新滴定至6.9~7.1;6)將溶液轉移到1L玻璃量筒中,加入水定容至1L;7)用無(wú)菌真空過(guò)濾膜過(guò)濾配制的轉染試劑溶液;8)按需分裝,4°C儲存(切記不可冷凍);注:未經(jīng)配制的粉末有效期為2年。配置成液體后分裝在合適的瓶子中,并且保存在4℃的轉染試劑將可在6個(gè)月之內保持性能。如jin用于蛋白定性研究,分裝的轉染試劑可延長(cháng)有效使用期至1年。

細胞分盤(pán):通過(guò)胰酶消化收集細胞,用適當的完全培養基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養皿上(根據實(shí)驗需要選擇培養皿,使細胞貼壁后所占總面積達到培養皿面積的70-90%)。根據細胞貼壁情況于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當細胞貼壁完全后即可開(kāi)始轉染。轉染前換入2mL預熱的無(wú)血清培養基。2、制備PEI-DNA混合物:以60mm組織培養皿用420μL反應總體積為例。準備兩支1.5mL離心管,一管將質(zhì)粒DNA(總量2-8μg為佳)加入240μLHBS中,混勻。另一管中則用HBS將100μM的PEI儲存液稀釋成10μM,充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中,充分混勻后室溫靜置20-30min。將這420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養基中,輕輕搖動(dòng)平皿混勻,置于含5%~7%CO2的37℃溫箱孵育。注:每次用100μM的PEI儲存液前都需要先將其充分混勻,保證所取的濃度一致。3、培養6-10h后更換為37℃預熱的含有血清的培養基,繼續培養,16h左右可以觀(guān)測到報告基因的表達。PEI轉染試劑是一種穩定的具有較高的陽(yáng)離子電荷密度的有機大分子。

對于某些類(lèi)型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉染前兩天鋪板可顯著(zhù)提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉染時(shí)細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無(wú)蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養基以達到*轉染效率。其他的無(wú)蛋白培養基則需測試與線(xiàn)性PEI轉染試劑的兼容性。Polysciences 是一家化學(xué)品制造公司,產(chǎn)品廣泛應用于各個(gè)科研領(lǐng)域。公司成立于1961年,起初為電子顯微鏡提供納米級樣本制備方案,幫助科學(xué)家揭示未知領(lǐng)域。更多關(guān)于Polysciences PEI相關(guān)產(chǎn)品信息,歡迎咨詢(xún)上海曼博生物!也歡迎關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio,查看更多技術(shù)文章!PEI轉染試劑的穩定性如何?上海GMPPEI轉染試劑官方代理

快速起效,PEI助力科研人員在短時(shí)間內獲得轉染結果。上海GMPPEI轉染試劑官方代理

瞬時(shí)轉染方法1.接種細胞:轉染前,用膠原酶消化細胞并計數(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養的器皿,總體積如表1所示,每個(gè)孔置入的細胞量應能使轉染時(shí)細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無(wú)蛋白培養基稀釋適量DNA。用同樣的培養基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線(xiàn)性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線(xiàn)性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時(shí),請用圓底聚丙烯管,例如Falcon5mL/14mL離心管。3.轉染細胞:直接向每個(gè)孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養板/培養皿。在無(wú)血清條件下轉染時(shí),去除生長(cháng)培養基,替換成無(wú)血清培養基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染3h后,添加?體積的包含30%血清的生長(cháng)培養基。4.孵育細胞和分析結果:在CO2培養箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉染后快7h即可檢測到轉入基因的表達。請自行確定檢測時(shí)間。更多關(guān)于Polysciences PEI轉染試劑相關(guān)內容歡迎咨詢(xún)上海曼博生物!上海GMPPEI轉染試劑官方代理

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